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细胞迁徙和侵袭实验堪称肿瘤研究、药物开发的“黄金同伴”，，，，，，但实验翻车率也高居不下——细胞不“跑”、配景杂乱、效果难量化？？？？？？
别慌！今天小特带你解锁科研神器细胞嵌入皿的准确翻开方法，，，，，，从原理到实操细节，，，，，，助你轻松通关！
1 什么是细胞嵌入皿
细胞嵌入皿是细胞实验中的一种主要工具，，，，，，嵌入皿被嵌入作育板内，，，，，，形成上室与下室的结构，，，，，，两者划分填充上层与下层作育液，，，，，，并由一层通透性多孔膜相隔。。。。。。。它通过膜手艺模拟细胞的原始生长情形，，，，，，使得体外作育的细胞在形态和功效上更靠近于体内生长的细胞。。。。。。。这种手艺特殊适用于研究细胞对种种刺激（如生长因子、趋化因子或细胞外基质因素）的响应，，，，，，包括迁徙、趋化性和侵袭等征象。。。。。。。
2 迁徙or侵袭？？？？？？傻傻分不清晰
细胞嵌入皿关于评估细胞通过多孔膜迁徙或侵袭的能力尤为主要，，，，，，这种多孔膜模拟了细胞在体内必需穿越组织的条件，，，，，，迁徙或侵袭实验常用孔径为8μm。。。。。。。
◆迁徙实验（未添加基质胶）
在迁徙实验中，，，，，，细胞可以从上室直接迁徙到下室，，，，，，无需降解基质胶或侵入膜。。。。。。。这一类型的实验旨在评估细胞对化学诱导剂等的响应，，，，，，展示其迁徙能力。。。。。。。
◆侵袭实验（需添加基质胶）
在侵袭实验中，，，，，，细胞必需先将涂覆在膜顶部的细胞外基质（ECM）层降解掉，，，，，，才华进一步迁徙到下室中，，，，，，通过基质胶的设置，，，，，，增添了对细胞消化及穿透能力的磨练，，，，，，从而更准确地模拟并评估细胞在生物体内的行为特征。。。。。。。
3 侵袭实验拆解
操作办法
DAY 1
实验准备
1.视察细胞生长状态，，，，，，取生长状态优异的细胞去掉作育基，，，，，，加入无血清作育基饥饿处置惩罚24h。。。。。。。
2.将基质胶置于冰中并在4℃住宿融化，，，，，，将24孔细胞嵌入皿、移液管或枪头放入4℃预冷住宿。。。。。。。
DAY 2
铺胶 / 铺板
基质胶铺胶准备
3.稀释基质胶：在冰上，，，，，，将基质胶用无血清作育基稀释至1mg/mL，，，，，，使用预冷的吸头混淆至匀称状态。。。。。。。
4.匀称铺胶：取60μL上述混淆溶液笔直加入嵌入皿中，，，，，，使其匀称平铺在底部，，，，，，注重匀称铺胶，，，，，，不要爆发气泡。。。。。。。
5.凝胶：随后置于37℃孵育2-4h聚合成薄膜，，，，，，小心吸出未团结的基质胶。。。。。。。
6.基底膜水化：加入100μL无血清作育基，，，，，，将作育板置于37℃作育箱孵育30min，，，，，，举行水化。。。。。。。
细胞铺板
7.去除嵌入皿中液体，，，，，，检查是否有液体穿过上室进入到下室中，，，，，，若没有，，，，，，则可用于接种细胞。。。。。。。
8.用无血清作育基配制样本，，，，，，建议将事情液浓度设置成终浓度的2倍。。。。。。。随后按样本：细胞悬液=1：1的比例加入到嵌入皿内。。。。。。。
9.取500μL含10%FBS的完全作育基加入24孔板下室，，，，，，用镊子将嵌入皿置于24孔板内。。。。。。。
10.消化饥饿后的细胞，，，，，，用1mL无血清作育基重悬，，，，，，举行细胞计数，，，，，，凭证上室细胞接种数目调解细胞密度。。。。。。。
11.先加入50μL的样本事情液，，，，，，再加入50μL的细胞悬液，，，，，，此时样本浓度被稀释2倍即为终浓度。。。。。。。
12.将24孔板置于37℃，，，，，，5%CO2，，，，，，90%湿度条件下作育24-48h。。。。。。。
DAY 3/4
细胞牢靠 / 染色
13.取出嵌入皿，，，，，，去除作育液，，，，，，在24孔板清洁的孔中加入600uL 4%多聚甲醛牢靠液，，，，，，将小室放入孔中室温牢靠15-30分钟，，，，，，弃牢靠液，，，，，，PBS洗涤小室内外2-3次。。。。。。。
14.在24孔板清洁的孔中加入600uL结晶紫染色液，，，，，，将小室放入孔中室温染色8-10分钟，，，，，，弃染色液，，，，，，PBS洗涤小室内外2-3次。。。。。。。
15.适当风干或用棉签擦干后，，，，，，在显微镜下视察。。。。。。。
16.用小镊子小心揭下膜，，，，，，底面朝上，，，，，，适当风干后，，，，，，移至载玻片上用中性树胶封片。。。。。。。在高倍显微镜下举行视察和照相，，，，，，随机选取5个视野(上、下、中央、左、右各1个)计数呈紫色的细胞，，，，，，统计效果。。。。。。。
注：“非贴壁”细胞计数，，，，，，由于某些细胞自身的缘故原由或某些膜的关系，，，，，，有时细胞在穿过膜后不可附着在膜上，，，，，，而是掉进下室。。。。。。。这种情形下可以网络下层作育液，，，，，，用流式细胞仪计数细胞量，，，，，，也可用细胞计数的要领直接在镜下计数。。。。。。。
效果示例
使用细胞嵌入皿检测细胞的迁徙和侵袭能力时，，，，，，需要凭证细胞特征选择嵌入皿的孔径，，，，，，如下图，，，，，，在差别孔径的PC膜嵌入皿中以相同密度接种HT22细胞，，，，，，视察其迁徙情形：
图：HT22细胞在差别孔径嵌入皿的迁徙情形
图：HT22细胞的尺寸漫衍
结论：使用孔径为8μm的PC膜嵌入皿时，，，，，，HT22细胞体现出较好的迁徙能力，，，，，，且未有显着的细胞遗漏、细胞在孔底贴壁等征象
4 实验避坑指南
**细胞死活看仔细**
接种前检测活性＞95%，，，，，，死细胞会滋扰配景
**趋化梯度别搞反**
下层作育基血清浓度或趋化因子必需高于上层
**基质胶别成“拦路虎”**
基质胶过厚或未完全固化会导致细胞无法穿透
**作育箱湿度要拉满**
避免小室边沿液体蒸发，，，，，，破损趋化梯度
**阴性比照不可少**
下层用无血清作育基，，，，，，验证细胞是否自觉迁徙
5 洁特生物细胞嵌入皿
* 规格：作育板（6孔、12孔、24孔）
作育皿（100mm）
* 类型：悬挂式、插入式
* 膜孔径：0.1μm、0.4μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、8.0μm、12.0μm
* 膜材质：膜聚碳酸酯(PC)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)
* 外貌处置惩罚：TC处置惩罚外貌
6 细胞嵌入皿怎么选
洁特生物提供多种规格的细胞嵌入皿，，，，，，以知足差别实验场景的需求。。。。。。。在选择细胞嵌入皿时，，，，，，以下几个方面是需要思量的要害因素：
01
规格
洁特生物细胞嵌入皿提供24孔、12孔、6孔作育板以及100mm作育皿等四种容器规格的产品。。。。。。。选择时应凭证细胞数目、实验组别设置和实验规模等条件来决议。。。。。。。
02
膜材质
洁特生物细胞嵌入皿提供两种高品质膜材选择，，，，，，划分为PET膜与PC膜，，，，，，二者均具备标准化的额定孔密度，，，，，，可知足差别实验需求。。。。。。。
a) 聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜：拥有卓越的透光性能，，，，，，能在显微镜下清晰泛起细胞状态与细胞层的形成历程，，，，，，是光镜视察、电镜检测以及免疫组化等实验的不二之选。。。。。。。
b) 聚碳酸酯（PC）膜：细胞粘附性更强，，，，，，可有用增进跨膜物质交流，，，，，，尤其适用于组别较多、对细胞粘附与物质交流要求较高的实验场景
03
孔径
洁特生物细胞嵌入皿提供0.1μm、0.4μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、8.0μm、12.0 μm等孔径选择，，，，，，可参考下表选择合适的孔径。。。。。。。
7 细胞嵌入皿订购信息
